ⅠNukleiinihappoijohdanto
Nukleiinihappo on jaettu deoksiribonukleiinihappoon (DNA) ja ribonukleiinihappoon (RNA), joista RNA on jaettu ribosomaaliseen RNA:han (rRNA), lähetti-RNA:han (mRNA) ja siirto-RNA:han (tRNA) eri toimintojensa mukaan.DNA on keskittynyt pääasiassa ytimeen, mitokondrioihin ja kloroformiin, kun taas RNA on pääasiassa jakautunut sytoplasmaan.Geeniekspression aineellisena perustana nukleiinihappojen uutto on erittäin tärkeä rooli molekyylibiologian tutkimuksessa ja kliinisessä molekyylidiagnosissa.Nukleiinihapon uuton pitoisuus ja puhtaus vaikuttavat suoraan myöhempään PCR:ään, sekvensointiin, vektorin rakentamiseen, entsyymidigestoon ja muihin kokeisiin.
Ⅱ Nukleiinihapon uutto- ja puhdistusmenetelmä
① Fenoli/kloroformiuuttomenetelmä
Fenoli/kloroformiuutto on klassinen DNA-uuttomenetelmä, jossa käytetään pääasiassa kahta erilaista orgaanista liuotinta näytteiden käsittelyyn, liuottamalla DNA-pohjaista nukleiinihappoa vesifaasiin, lipidejä orgaaniseen faasiin ja proteiineja näiden kahden faasin väliin.Tämän menetelmän etuna on alhainen hinta, korkea puhtaus ja hyvä vaikutus.Haittoja ovat monimutkainen käyttö ja pitkä käyttöikä.
② Trizol-menetelmä
Trizol-menetelmä on klassinen menetelmä RNA:n uuttamiseen.Trizol-menetelmä jaetaan kloroformilla sentrifugoinnin jälkeen vesifaasiin ja orgaaniseen faasiin, jossa RNA liuotetaan vesifaasiin, vesifaasi siirretään uuteen EP-putkeen, saadaan isopropanolin lisäyksen jälkeen saostus ja sen jälkeen etanolipuhdistus.Tämä menetelmä soveltuu RNA:n erottamiseen eläinkudoksista, soluista ja bakteereista.
③ Keskipakopylväspuhdistusmenetelmä
Sentrifugipylväspuhdistusmenetelmä voi adsorboida DNA:ta spesifisesti erityisten piimatriisi-adsorptiomateriaalien läpi, kun taas RNA ja proteiini voivat kulkea sujuvasti ja käyttää sitten korkean suolan, matalan pH:n yhdistämiseen nukleiinihappoa, matalan suolan korkean PH-arvon eluutiota nukleiinihapon erottamiseen ja puhdistamiseen.Edut ovat korkea puhdistuspitoisuus, korkea stabiilisuus, orgaanisen liuottimen tarve ja alhaiset kustannukset.Haittapuolena on, että se on sentrifugoitava askel askeleelta, enemmän toimintavaiheita.
④ Magneettisten helmien menetelmä
Magneettisten helmien menetelmä on jakaa solukudosnäyte lysaatin läpi, vapauttaa näytteessä oleva nukleiinihappo, minkä jälkeen nukleiinihappomolekyylit adsorboituvat spesifisesti magneettihelmen pintaan, kun taas epäpuhtaudet, kuten proteiinit ja sokerit jäävät sisään. nestettä.Solukudoksen pilkkomisen, magneettisten helmien sitoutumisen nukleiinihapolla, nukleiinihappopesun, nukleiinihappoeluoinnin jne. kautta saadaan lopulta puhdasta nukleiinihappoa.Edut ovat yksinkertainen käyttö ja lyhyt käyttöaika ilman vaiheittaista sentrifugointia.Sillä on alhaiset tekniset vaatimukset ja se voi toteuttaa automaattisen ja massatoiminnan.Spesifinen magneettihelmen ja nukleiinihapon yhdistelmä tekee uutetusta nukleiinihaposta korkean pitoisuuden ja puhtauden.Haittapuolena on, että nykyinen markkinahinta on suhteellisen kallis.
⑤ Muut menetelmät
Edellä olevien neljän menetelmän lisäksi on olemassa kiehuva krakkaus, väkevöity suolamenetelmä, anioninen pesuainemenetelmä, ultraäänimenetelmä ja entsymaattinen menetelmä jne.
Ⅲ Nukleiinihapon uuton tyyppi
Foregenellä on maailman johtava Direct PCR -alusta, kaksisarainen RNA-eristysalusta (vain DNA + RNA).Päätuotteita ovat DNA/RNA-eristyssarjat, PCR ja Direct PCR -reagenssit molekyylilaboratorioreagenssisarjat.
① RNA:n kokonaisuutto
Kokonais-RNA:n uuttonäytteet sisältävät verta, soluja, eläinkudoksia, kasveja, viruksia jne. Kokonais-RNA:n uuttamisella voidaan saada korkea puhtaus ja korkea pitoisuus kokonais-RNA:ta, jota voidaan käyttää RT-PCR:ssä, siruanalyysissä, in vitro translaatiossa, molekyylikloonaus, Dot Blot ja muut kokeet.
Foregeniin liittyväRNA-eristyssarjat
Animal Total RNA Isolation Kit--Poimi nopeasti ja tehokkaasti erittäin puhdasta ja laadukasta kokonais-RNA:ta erilaisista eläinkudoksista.
Cell Total RNA Isolation Kit--Erittäin puhdistettua ja korkealaatuista kokonais-RNA:ta voidaan saada eri viljellyistä soluista 11 minuutissa.
Plant Total RNA Isolation Kit--Erota nopeasti korkealaatuista kokonais-RNA:ta kasvinäytteistä, joissa on alhainen polysakkaridi- ja polyfenolipitoisuus.
Viruksen RNA:n eristyspakkaus--Eristä ja puhdista virus-RNA nopeasti näytteistä, kuten plasmasta, seerumista, soluttomista ruumiinnesteistä ja soluviljelmien supernatanteista.
② Genomisen DNA:n uuttaminen
Genomisen DNA:n uuttonäytteitä ovat maaperä, ulosteet, veri, solut, eläinkudokset, kasvit, virukset jne. Genomisen DNA:n uuttamista voidaan käyttää entsyymidigestiossa, DNA-kirjaston rakentamisessa, PCR:ssä, vasta-aineiden valmistuksessa, Western blot -hybridisaatioanalyysissä, geenisirussa, korkeassa -läpivirtaussekvensointi ja muut kokeet.
Foregeniin liittyväDNA-eristyssarjat
Eläinkudosten DNA-eristyspakkaus- Genomisen DNA:n nopea erottaminen ja puhdistaminen useista lähteistä, kuten eläinkudoksista, soluista jne.
Blood DNA Midi Kit (1-5 ml)--Puhdista nopeasti korkealaatuinen genominen DNA antikoaguloidusta verestä (1-5 ml).
Bukkaalinen vanupuikko/FTA-kortti DNA-eristyssarja--Puhdista nopeasti korkealaatuinen genominen DNA bukkaalista vanupuikko-/FTA-korttinäytteistä.
Kasvien DNA:n eristyspakkaus--Puhdistaa ja saada korkealaatuista genomista DNA:ta nopeasti kasvinäytteistä (mukaan lukien polysakkaridit ja polyfenolikasvinäytteet)
③ Plasmidiuutto
Plasmidi on eräänlainen pyöreä pienimolekyylinen DNA soluissa, joka on yleinen DNA-rekombinaation kantaja.Plasmidin uuttomenetelmänä on poistaa RNA, erottaa plasmidi bakteerien genomisesta DNA:sta ja poistaa proteiini ja muut epäpuhtaudet suhteellisen puhtaan plasmidin saamiseksi.
General Plasmid Mini Kit- Puhdista nopeasti korkealaatuinen plasmidi-DNA transformoiduista bakteereista rutiininomaisiin molekyylibiologisiin kokeisiin, kuten transformaatioon ja entsyymidigestioon
④ Muut uuttotyypit, miRNA-uutto jne.
Eläinten miRNA-eristyspakkaus-- Erota nopeasti ja tehokkaasti pieniä RNA-fragmentteja 20-200 nt miRNA:sta, siRNA:sta, snRNA:sta erilaisista eläinkudoksista ja -soluista
Ⅳ Vaatimukset nukleiinihappojen uuttamiselle ja puhdistukselles
① Nukleiinihapon primaarirakenteen eheyden varmistamiseksi.
② Vähentää proteiinien, sokereiden, lipidien ja muiden makromolekyylien häiriöitä
③ Nukleiinihapponäytteissä ei saa olla orgaanista liuotinta tai suuria metalli-ionien pitoisuuksia, jotka voivat estää entsyymiä.
④ RNA- ja muu nukleiinihappokontaminaatio tulee eliminoida DNA:ta uutettaessa ja päinvastoin.
Postitusaika: 24.11.2022
